ภาพรวม

การวัดค่า PD-L1 แบบดั้งเดิมนั้นหมายถึงการย้อมสไลด์เนื้อเยื่อ การทดสอบ PCR เชิงปริมาณด้วยฟลูออเรสเซนต์ในเลือดนำเสนออีกทางเลือกหนึ่ง: โดยอ่านค่า mRNA ของ PD-L1 ที่หมุนเวียนอยู่ในตัวอย่าง ทำให้ได้สัญญาณเชิงปริมาณที่สามารถทำซ้ำได้โดยไม่ต้องตัดชิ้นเนื้อ สำหรับผู้ซื้อแบบ B2B กลไกมีความสำคัญเพราะเป็นตัวกำหนดว่าผลลัพธ์จะแสดงออกมาอย่างไร อุปกรณ์ที่ห้องปฏิบัติการต้องการ และการทดสอบจะเข้ากันได้กับเส้นทางของยาต้านภูมิคุ้มกันอย่างไร การทำความเข้าใจหลักการจะช่วยให้ทีมจัดซื้อเลือกบริการที่ผลลัพธ์ตรงกับคำถามทางคลินิก

วิธีการทำงาน

วิธีการนี้จะแยก RNA ออกจากตัวอย่างเลือดและแปลงเป็น DNA ที่เข้ากันได้ด้วยการถอดรหัสย้อนกลับ จากนั้นคู่ของไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีนจะขยายเป้าหมาย PD-L1 ในระหว่างการหมุนเวียน ในขณะที่โพรบฟลูออเรสเซนต์จะรายงานการสะสมแบบเรียลไทม์ เครื่องมือจะบันทึกฟลูออเรสเซนต์ในแต่ละรอบและระบุค่ารอบเกณฑ์ หรือค่า Ct ซึ่งเป็นค่าที่สัญญาณข้ามเส้นที่กำหนด ค่า Ct ที่ต่ำกว่าหมายถึงมีแม่แบบเริ่มต้นมากกว่า ดังนั้นข้อความ PD-L1 จึงมีความอุดมสมบูรณ์มากกว่า เส้นโค้งมาตรฐานที่สร้างจากความเข้มข้นที่ทราบจะแปลงค่า Ct เป็นระดับการแสดงออกสัมพัทธ์ที่ห้องปฏิบัติการสามารถรายงานได้อย่างสม่ำเสมอ

ข้อบ่งใช้

รูปแบบ PCR ในเลือดเหมาะสำหรับผู้ป่วยที่เนื้อเยื่อเนื้องอกหาได้ยาก และกรณีที่การวัดซ้ำตามช่วงเวลาเป็นประโยชน์ในการติดตาม นอกจากนี้ยังสนับสนุนโปรแกรมการวิจัยและการคัดกรองที่ต้องการตัวอย่างที่รุกรานน้อยที่สุดและผลลัพธ์ที่เป็นตัวเลข ทีมจัดซื้อควรถือผลลัพธ์เป็นระดับการแสดงออกเชิงปริมาณมากกว่าคะแนนบวกหรือลบที่คงที่ และยืนยันว่ารายงานระบุหน่วยและช่วงอ้างอิงเพื่อให้สามารถตีความตัวเลขได้โดยไม่มีความคลุมเครือ

ตัวอย่างและการรายงาน

หลอดเลือดมาตรฐานให้ RNA ที่จำเป็นสำหรับการทดสอบ ห้องปฏิบัติการจะรายงานค่า Ct ตัวเลขการแสดงออกสัมพัทธ์ และแถบการตีความที่ได้จากค่าตัดที่ตรวจสอบแล้ว เนื่องจากผลลัพธ์เป็นตัวเลข จึงสามารถรวมเข้ากับแดชบอร์ดและการติดตามผู้ป่วยรายเดียวกันตามช่วงเวลาได้อย่างราบรื่น รายงานจะกลับมาในรูปแบบไฟล์ที่มีโครงสร้างซึ่งจับคู่ตัวระบุตัวอย่างกับผลการแสดงออก ซึ่งช่วยลดความซับซ้อนของการตรวจสอบและการเปรียบเทียบการทดสอบซ้ำ

การจัดเก็บและการจัดหา

RNA ไม่เสถียร ดังนั้นหลอดเก็บและสภาวะการขนส่งต้องปกป้องกรดนิวคลีอิกจนกว่าจะสกัดได้ ชุดอุปกรณ์จะจัดส่งพร้อมกับรีเอเจนต์การทำให้เสถียรตามที่ซัพพลายเออร์ระบุ และห้องปฏิบัติการควรปฏิบัติตามเวลาที่กำหนดก่อนดำเนินการ เมื่อจัดหาบริการ PCR นี้ ให้ตรวจสอบว่าห้องปฏิบัติการตรวจสอบการทดสอบของตนกับเส้นโค้งมาตรฐานที่บันทึกไว้ และรายงานทั้งค่า Ct และระดับการแสดงออกที่แปลงแล้ว เนื่องจากความโปร่งใสในวิธีการจะช่วยรักษาประโยชน์ของตัวเลขในภายหลัง

คำถามที่พบบ่อย

ถาม: การทดสอบ PCR ด้วยฟลูออเรสเซนต์รายงานระดับ PD-L1 จากเลือดได้อย่างไร? ตอบ: การถอดรหัสย้อนกลับจะสร้าง cDNA จาก RNA ในเลือด ไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีนจะขยายเป้าหมาย PD-L1 และโพรบฟลูออเรสเซนต์จะติดตามการสะสมเพื่อให้เครื่องมือรายงานค่า Ct ซึ่งจะแปลงเป็นระดับการแสดงออกสัมพัทธ์

ถาม: ผลการทดสอบ PCR ในเลือดเหมือนกับคะแนน PD-L1 จากเนื้อเยื่อหรือไม่? ตอบ: ไม่ การทดสอบในเลือดวัดปริมาณ mRNA ของ PD-L1 ในขณะที่การทดสอบเนื้อเยื่อจะให้คะแนนโปรตีนโดยการย้อมสี ทั้งสองตอบคำถามที่เกี่ยวข้องแต่แตกต่างกัน และควรอ่านโดยคำนึงถึงความแตกต่างนั้น

ถาม: เหตุใดความเสถียรของ RNA จึงมีความสำคัญต่อการทดสอบนี้? ตอบ: RNA เสื่อมสภาพอย่างรวดเร็ว ดังนั้นการเก็บ การขนส่ง และเวลาในการถือครองต้องรักษากรดนิวคลีอิก มิฉะนั้นค่า Ct จะสูญเสียความแม่นยำและตัวเลขการแสดงออกจะไม่น่าเชื่อถือ